Техника одновременного одношажного хода: Одновременный одношажный ход | Картотека по ЗОЖ:

Разное

Содержание

Конспект урока «Разучивание одновременного одношажного хода» 6 Класс

Конспект открытого урока по лыжным гонкам

для учащихся 6 классов.

Цель: Развитие выносливости, быстроты.

Тема урока: Разучивание одновременного одношажного хода.

Составитель: учитель физической культуры МБУ СОШ № 71, г.о. Тольятти

Задачи:

Образовательные

  1. Обучение одновременного одношажного хода.

  2. Развитие двигательных качеств.

Воспитательные:

  1. Воспитание координационных способностей.

  2. Популяризация лыжного спорта.

  3. Воспитание волевых качеств.

Оздоровительные:

  1. Развитие силы мышц рук и ног.

  2. Формирование правильной осанки.

  3. Закаливание организма.

Место проведения: школьный стадион

п/п

___________________________________________________________________________________

*1. После окончания толчка руками лыжник скользит, согнувшись на двух лыжах, голова чуть приподнята.
2-3. Продолжается скольжение, лыжник медленно выпрямляется и легким маятникообразным движением выносит палки вперед.
4. Лыжник почти полностью выпрямляется, начинается подготовка к отталкиванию — масса тела перемещается на носки, ноги слегка сгибаются, палки выведены вперед перед постановкой на снег.
5. Палки ставятся на снег чуть впереди креплений, начинается толчок руками.
6. Основное усилие на палки развивается за счет сгибания туловища. Угол сгибания рук в локтевых суставах несколько уменьшается.
7-8. Толчок заканчивается полным разгибанием рук. Кисти рук находятся на уровне не выше колен, угол наклона палок наибольший.

9. После окончания толчка лыжник по инерции скользит, согнувшись, на двух лыжах.

Содержание урока

Дозировка

Организационно – методические указания

I

Подготовительная часть

10 – 15 мин.

1.1

1.2

Построение. Приветствие. Сообщение задач урока.

Разминка:

Ходьба на лыжах.

3 – 5 мин.

10 мин.

Проверить готовность к уроку, исправность лыжного инвентаря.

Учащиеся по учебному кругу выполняют ходьбу на лыжах в медленном темпе. Дыхание равномерное 300 -400 м

II

Основная часть

25 – 30 мин.

2.1.

2.2

2.3.

2.4.

2.5.

2.6.

2.7.

2.8.

Ход урока:

Рассказ о выполнении элемента:

— цикл одношажного хода состоит из одного толчка ногой с последующим одновременным толчком двумя ногами и скольжение на двух лыжах.

Объяснение техники выполнения хода.

Показ учителя.

Показ иллюстрации

Обучение

— имитация хода на месте:

— выполнение одновременного одношажного хода по учебному кругу

— выполнение одновременного одношажного хода по прямой

— эстафета с этапом до 50 м.

1 мин.

1 мин.

1мин

2 мин.

1 мин.

7 мин.

10 мин.

7 мин.

Учащиеся стоят в шахматном порядке, восстанавливая дыхание, слушают объяснение учителя.

Учащиеся выполняют вместе с учителем:

И.п. – средняя стойка

1.- вынести палки вперед полусогнутыми в локтях руками

2.- поставить палки на снег и сделать шаг-выпад правой ногой и перенести вес тела на нее

3.- толчок руками и ногой одновременно

4.- приставить левую ногу, а руки выпрямить.

На счет «раз» — поставить палки на снег и

выполнить толчок левой ногой , на счет «два» — подтянуть левую ногу и выполнить толчок палками (рис.1).


(рис.1) *

Учащиеся выполняют ходьбу на лыжах по прямой.

Проверить индивидуально у каждого технику выполнения хода.

Поделить класс на три-четыре команды, определить расстояние и поставить фишки.

Эстафету передавать точно на линии.

III

Заключительная часть

10 – 15 мин.

3.1.

3.2.

3.3.

Прохождение дистанции до 1,5 – 2км.

Упражнения на восстановление дыхания.

Построение. Подведение итогов урока.

10 мин.

2-3 мин.

1-2 мин.

Учащиеся в колонну по одному вокруг школы выполняют ходьбу на лыжах в медленном темпе.

Палки положить на снег. Руки вверх — вдох, руки вниз — выдох.

Организованный уход.

лыжные ходы — Техника одновременного бесшажного хода


Подборка по базе: Информационно-измерительная техника (иит).doc, Жылу техникасы.doc, ПОМОДОРО техника.docx, РП Электронная техника (АП) 2021.docx, ПД2 спец техника 2.doc, спец техника 04.12.21.docx, 3.11 КП Пожарная техника, Матвеев М.И..docx, АТП 20- 1_ОП.07 Электронная техника _09.02.2022.pptx, Мәтінмен жұмыс жасау техникасы.docx, Фиксирующие и репонирующие аппараты для лечения переломов нижней

ТЕХНИКА ОДНОВРЕМЕННОГО БЕСШАЖНОГО ХОДА.


В одновременном бесшажном ходе происходит свободное скольжение на двух лыжах с отталкиванием только одними руками одновременно. Из исходного положения окончание отталкивания палками, лыжник плавно выпрямляет туловище, вынося палки вперёд, кольцами к себе (кисти рук на уровне глаз, чуть шире плеч, вес тела на передней части ступней, локти слегка в стороны). Затем выполняется отталкивание, палки ставят на снег на уровне носков ботинок, сначала давление осуществляется за счёт сгибания туловища, а затем за счет разгибания рук. Большие пальцы рук касаются коленей. В конце отталкивания рука и палка составляют одну прямую линию, палка удерживается большим и указательным пальцами. Туловище наклонено вперёд до угла 90градусов

ТЕХНИКА ОДНОВРЕМЕННОГО ОДНОШАЖНОГО ХОДА

Цикл хода состоит из одного скользящего шага и одновременного отталкивания палками

1.Скоростной вариант. Из положения окончания отталкивания (свободное скольжение на двух лыжах) лыжник выносит палки кольцами к себе под острым углом одновременно с шагом-выпадом ногой вперёд и отталкиванием другой ногой, отталкивание ногой совпадает с окончанием выноса рук. Затем лыжник наклоняет туловище вперед и резко отталкивается палками одновременно с постановкой толчковой ноги к опорной. Приходит в положение окончания отталкивания (т. е. скользит на двух лыжах).

2.Основной вариантвынос рук вперед происходит кольцами от себя до начала отталкивания.



ТЕХНИКА ОДНОВРЕМЕННОГО ДВУХШАЖНОГО ХОДА

Цикл хода состоит из двух скользящих шагов и одновременного отталкивания палками. Из исходного положения окончания отталкивания (свободное скольжение на дух лыжах) лыжник переносит вес тела на левую ногу делая скользящий шаг правой нагой одновременно вынося палки до уровня калений. Затем следует скользящий шаг левой нагой с продолжением выноса палок до уровня глаз, после этого выполняется отталкивание палками с приставлением маховой ноги к опорной, лыжник приходит в исходное положение, цикл хода повторяется.



ТЕХНИКА ПОПЕРЕМЕННОГО ДВУШАЖНОГО ХОДА

Лыжник окончил отталкивание свободной ногой, одновременно с этим толкающая нога, а также палки находятся в воздухе, а скольжение производится на одной лыже. Перед завершением спортсмен выбрасывает свободную ногу вперед. Соскальзывание с распрямлением на загруженной ноге. Старт движения происходит с установки палки на твердую поверхность примерно под 80 градусов, а одновременно загруженная нога разгибается. Вторая нога отрывается и производится взмах. После этого вновь выполняется подседание на опорной ноге.

Скольжение с подседанием. Из сгибания загруженной ноги, которое произошло во втором периоде, производится ее распрямление. Корпус спортсмена склоняется по направлению движения на 5-8 градусов (ориентиром служит лыжня). Рука, выполняющая выталкивание, изгибается, а маховая рука распрямляется. Маховая нога с усилием выносится вперед.

Выпад с приседанием. Когда лыжи приостановлены предыдущим движением, происходит выпрямление в бедрах совместно с приседанием и производится сильный толчок.

Завершает цикл выталкивание палкой и ногой для сохранения тенденции движения маховой лыжи. Рука с палкой образуют единое направление, а маховая рука направлена вниз под 45 градусов.



План конспект занятия по физической культуре

Автор: Преподаватель Иванов Аял Владимирович.

ГБПОУ РС(Я) «Якутский педагогический колледж им. С.Ф. Гоголева» Якутск.

План конспект урока. Тема: «Обучения технике одновременного одношажного хода» (основной вариант)

Файл: план конспект урока

ПЛАН-КОНСПЕКТ занятия по физической культуре

Раздел: «Лыжная подготовка»

Тема урока: «Обучения технике одновременного одношажного хода» (основной вариант)

Раздел: Лыжная подготовка

Форма проведения: Деятельностная технология с использованием ИКТ

Тема: «Обучения технике одновременного одношажного хода» (основной вариант)

Тип урока: Обучение нового материала

Цель урока: Обучение студентов умению проектировать технику основных упражнений на уроках лыжной подготовки

Задачи урока:

Образовательная:

— Обучение технике одновременного одношажного хода.

— Обучение согласованным движениям рук и нок при выполнении техники одновременного одношажного хода.

— Совершенствование подъема елочкой и спуска в основной стойке.

Оздоровительная:

— Оздоровление и закаливание организма обучающихся на уроках лыжной подготовки.

— Укрепление С.С.С. и дыхательной системы.

Воспитательная: Привитие культуры самоорганизации учащихся посредством сотрудничества на уроке (развитие умение согласованной работы при выполнении учебных заданий в группах, воспитание чувства коллективизма и трудолюбия).

Развивающая: Развитие внимания, памяти, логического мышления и формирования рефлексивного умения учащихся.

Оборудование: лыжный инвентарь, технические средства обучения (видеокамера, фотоаппарат, ноутбук, проектор, интерактивная доска).

п/п

Частные задачи урока Средства, содержание частей урока Дози­ровка Организационно -методические указания
I Подготовительная часть 15-20
Организовать учащихся к принятию цели и учебных задач.

Подготовка организма занимающихся к более интенсивной нагрузке в основной части урока

Построение, приветствие, сообщение цели, задач и организация Де. учащихся на уроке.

Выполнение команд: «Равняйсь!» « Смирно!» Вольно!

Передвижение к месту занятий.

Подготовка учебной площадки.

3 — 5

12 -15

Добиться четкого и согласованного выполнения строевых команд.

Двигаться в колонне по одному, держать дистанцию 1 метр

Проложить параллельные лыжни, Хорошо подготовить опору для палок

II Основная часть 40- 45

Создать двигательные

представления о технике одновременного одношажного хода

Развить самостоятельность мышления по проектированию техники одновременного одношажного хода

Согласовать работу всех частей

тела в определенно

последовательности.

Построение группы

Краткий рассказ о технике одновременного одношажного хода.

Показ одновременного одношажного хода

1. Маховые,маятникообразные движения правой (левой) ногой вперед-назад. Из и. п. стоя с опорной на палки, поставленные вереди, перенести вес тела на левую (правую) лыжу, правая (левая) ступня у пятки опорной ноги.

2.Имитация одновременного одношажного хода на три счета: из и. п.- начало двухопорного скольжения- на счет «раз» плавно выпрямить туловище и вынести руки вперед. На счет «два» выполнить шаг правой (левой) ногой вперед, другую отвести

вверх- назад (т.е. прийти в положение начала одноопорного скольжения). На

счет «три» наклонить туловище вперед, отвести руки назад (имитируя отталкивание) и приставить толчковую ногу к опорной.

 

3.Выполнение хода на три счета, передвигаясь по лыжне с уклоном 2-3

градуса в медленном темпе.

 

4. Выполнение одновременного

одношажного хода слитно (без паузы) под небольшой уклон

5.Выполнение одновременного одношажного хода на равнине

6. Совершенствование подъема «елочкой» и спуска в основной стойке.

7. Прохождение дистанции: юноши

девушки

3 — 5

2х15раз

каждой ногой

3-4

3-4

4-6

3-4

4-5

2,5 км

2 км

Построить группу в одну шеренгу

Рассказ должен быть кратким, понятным, Объяснить, где и как применяется этот ход, из каких элементов состоит.

Выполнять с полной амплитудой движения. Мах ногой начинать движением в тазобедренном суставе опорной ноги, носок брать немного на себя.

Упражнение без палки и с

Палками

Выпрямление туловища начинать с движения рук в вперед до уровня подбородка

Не начинать отталкивание

Ногой, пока палки не займут положение кольцами вперед

Обращать внимание занимающихся на своевременный активный

вынос рук махом, на законченность отталкиваний

ногами и ногами

Обратить внимания на правильной постановке лыж и на работу рук. Спускаемся строго по одному соблюдая дистанцию.

 

При прохождении дистанции стараться чаще использовать одновременный одношажный ход

 

III Заключительная часть 20-25
Отметить удачные моменты учебной деятельности.

Развивать умение анализировать, оценивать, корректировать результаты своей и деятельность других студентов.

Обмен мнениями.

1. Построение, замечания по уроку, задания на дом

2. Придвижение к лыжной базе

3. Разбор ошибок с использованием ИКТ

Рефлексия по пройденным материалом

— тема

— техника выполнения

— основные ошибки

— методика обучения

— методические рекомендации по исправлению ошибок

— Выявление уровня овладения техникой ведения мяча (с помощью оценочной карточки).

8-12

12-14

Построить учащихся в одну шеренгу

Двигаться в колонне по одному, дистанция 1 метр

Аудитория № 313

КАРТОЧКА САМООЦЕНКИ

Задание: Вам следует оценить себя на выполнение техники одновременного одношажного хода.

ФИО студента __________________________________________

Составляющие — правильность выполнения техники одновременного одношажного хода Ставьте определенные цифры по критериям
Уметь правильно работать руками « »
Уметь правильно отталкиваться ногами « »
Уметь согласовать работу всех частей

тела в определенной последовательности.

« »

Критерии:

3 – высокий уровень умения.

2 – средний уровень умения.

1 — низкий уровень умения.

Физическая культура реферат — Docsity

Министерство здравоохранения Московской области Государственное бюджетное профессиональное образовательное учреждение Московской области «МОСКОВСКИЙ ОБЛАСТНОЙ МЕДИЦИНСКИЙ КОЛЛЕДЖ №1» Рузский филиал Доклад По дисциплине: «Физическая культура» Тема: «Передвижение на лыжах, одновременный одношажный ход, одновременный двушажный ход» Выполнила студентка 2 курса 23 группы Траксина Виктория 2020 г Одновременный одношажный ход Одновременный одношажный ход является одним из основных, наиболее часто применяемых при передвижении на лыжах, так как позволяет развить высокую скорость скольжения — до 8 м/с. Чаще всего ход используется на равнине при хорошем скольжении и при твердой опоре для палок. С ухудшением условий скольжения его можно применять на пологих спусках. При отличном скольжении высококвалифицированные лыжники могут проходить начало пологих подъемов (при переходе на высокой скорости от равнины в подъем), используя этот ход. Цикл одновременного хода состоит из одного скользящего шага и одновременного толчка палками с последующим скольжением на обеих лыжах. Различают два варианта одновременного одношажного хода. Отличие связано с изменением согласованности в работе рук и ног. Основной вариант — руки выносят палки вперед до начала толчка ногой, толчок руками начинается сразу после окончания отталкивания ногой (два толчка следуют непрерывно один за другим). Стартовый вариант — одновременно с толчком ногой палки выносятся вперед, а отталкивание палками выполняется после небольшого проката на одной лыже. Основной вариант более экономичен (общее время цикла примерно на 0,4 с больше, чем в скоростном), так как частота движений ниже. Естественно, что скорость скольжения в основном варианте чуть меньше, чем в скоростном (на 1-2 м/с). Рис. 1. Одновременный одношажный ход (основной вариант) Основной вариант выполняется следующим образом (рис. 1): 1. После окончания толчка руками лыжник скользит на лыжах. 2. Медленно выпрямляясь, выводит палки вперед. 3. Предварительно перенеся вес тела на левую ногу, лыжник выполняет толчок левой ногой одновременно с постановкой палок на снег. 4. В момент окончания толчка ногой начинается отталкивание руками, которое выполняется так же, как и в других одновременных ходах. 5-6. Лыжник скользит на правой лыже, продолжая толчок руками. Левая нога активным маховым движением выносится вперед и приставляется к опорной в момент окончания Рис. 1. Одновременный двушажной ход Одновременный двушажной ход выполняется следующим образом (рис. 1): 1. После окончания одновременного толчка руками лыжник скользит на двух лыжах в согнутом положении и, медленно выпрямляясь, начинает выносить палки вперед. 2-3. Сосредоточив массу тела на левой ноге, после предварительного небольшого подсевания лыжник делает шаг правой вперед, продолжая вынос палок. После окончания толчка левой ногой начинается скольжение на правой. 4-5. Предварительно перенеся массу тела на правую лыжу и выполнив подсевание, лыжник отталкивается правой ногой; палки в это время выводятся кольцами вперед-и ставятся на снег. 6. В момент окончания толчка ногой палки приходят в рабочее положение (под острым углом вперед) и начинается отталкивание руками. 7. Продолжается отталкивание руками и скольжение на левой лыже. В это время правая нога непрерывным маховым движением выносится вперед. 8. С окончанием толчка руками правая нога приставляется к опорной и начинается скольжение на двух лыжах. Некоторое время лыжник пассивно скользит на двух лыжах, используя набранную скорость. Затем цикл движений повторяется. При объяснении или показе следует обратить внимание учеников на следующие детали хода, которые очень важны для достижения высокой скорости скольжения и экономичности движения: в момент проката недопустимо резкое выпрямление, так как это увеличивает давление лыж на снег и сокращает длину скольжения; палки выносятся вперед мягким, расслабленным маятникообразным движением с последующей энергичной постановкой на снег; давление на палки резко увеличивается сразу после постановки их; недопустимо отбрасывание палок назад-вверх после окончания отталкивания. После объяснения и показа техники данного хода целесообразно вместе со школьниками проимитировать без лыж все движения цикла хода, добиваясь согласованности в работе рук и ног и выполняя все элементы скользящего шага. После этого приступают к выполнению всего хода в целом при передвижении на лыжах. Ученики после показа и объяснения хода обычно довольно быстро осваивают общую схему движений. Дальнейшее изучение идет по пути устранения ошибок в цикле, а также совершенствования отдельных элементов и всего хода в целом. Нельзя допускать значительного падения скорости в момент скольжения на двух лыжах. Это приведет к неравномерности передвижения и к большей затрате сил. Оба шага в цикле хода должны быть длинными, сочетание сильных отталкиваний ногами и руками позволяет поддерживать высокую скорость передвижения. Если некоторые лыжники после показа и объяснения за несколько попыток (прохождение 2-3 учебных кругов) не осваивают в общих чертах согласованности движений, целесообразно провести обучение расчлененным методом под счет преподавателя с остановкой и проверкой положения частей тела после первого и второго шага. Затем можно выполнить движения в замедленном темпе под команду учителя. При такой последовательности освоение хода проходит всегда успешно. Указанными методическими приемами можно воспользоваться и при изучении других способов передвижения на лыжах, но прибегать к расчленению движений следует только в крайних случаях, когда целостный метод не дает нужного эффекта. Наиболее типичной ошибкой при передвижении этим ходом являются короткие «подбегающие» шаги. Внешне это выглядит как разбег перед отталкиванием руками. Данная ошибка обычно бывает вызвана недостаточно сильным или неверно (больше вверх, чем вперед) выполненным толчком ногой. Исправлению этой ошибки способствует передвижение по лыжне, размеченной ориентирами для отталкивания ногами (на расстоянии скользящих шагов). Кроме того, полезно повторить и другие упражнения для освоения и совершенствования скользящего шага. Встречаются ошибки и в работе рук, что уменьшает силу отталкивания: незаконченный толчок руками «до бедра». Причиной этому может быть неверно усвоенное движение, а также слишком короткие или слишком длинные петли у палок (ученики боятся потерять контроль за палкой и поэтому сжимают ее в кулаке). При исправлении этой ошибки необходимо требовать от учеников убирать руки за спину, как бы стараясь соединить там кисти рук. Заметно уменьшается сила толчка и при «провале» головы и туловища между рук при постановке палок в начале отталкивания. Появление такой ошибки может быть связано с широкой постановкой палок и, что встречается особенно часто, с сильным сгибанием рук и отведением локтей в сторону до начала отталкивания. Для устранения ошибки необходимо требовать от учеников держать близко друг к другу кисти рук и опущенные локти, а также постоянно смотреть на кисти рук. Ошибками также являются: чрезмерный наклон туловища (ниже горизонтального) при отталкивании руками, отбрасывание рук с палками вверх после окончания толчка. Последующее выпрямление туловища из низкого положения и перемещение рук с палками вниз вызывают инерционные силы и сокращение длины свободного скольжения. Это надо объяснить ученикам при исправлении указанных ошибок. Недопустимо и сгибание (приседание) ног при одновременном толчке руками — это вызывает снижение силы отталкивания, так как не создается жесткая система фуки — туловище — ноги) для передачи усилий от толчка руками на скольжение лыж. Ошибкой следует считать и быстрый (преждевременный) вынос палок вперед, в этом случае ученики вынуждены удерживать палки впереди в статическом положении, что нарушает общую согласованность движений. Необходимо объяснить способы постановки палок на снег под различными углами. При хорошем скольжении (под уклон) палки можно выносить кольцами вперед, что позволит своевременно выполнить «навал» туловищем на палки, усилить и удлинить отталкивание. При ухудшении скольжения или при движении по равнине палки ставятся более вертикально с тем, чтобы быстрее перевести их в острый угол, что сразу увеличит горизонтальную составляющую силу толчка. Следует иметь в виду, что, как только палки пройдут вертикальное положение (даже если они выбрасывались кольцами вперед), необходимо сразу увеличить давление на них (начать отталкивание), так как, создавая жесткую передачу усилий по замкнутой цепи «палки — руки — туловище -ноги — лыжи», лыжники уже частично уменьшают давление лыж на снег, а тем самым увеличивается скорость скольжения. В дальнейшем с уменьшением угла отталкивания палками скорость увеличивается за счет возрастания горизонтальной составляющей толчка. Ошибками считаются и широкая постановка палок (кольца ставятся далеко от лыжни), и широкое разведение локтей. Первоначальное обучение одновременному двухшажному ходу удобно проводить на учебной площадке, имеющей небольшой уклон. Лыжня должна иметь твердую опору для палок. Если часть учеников не смогла сразу освоить общую согласованность движений, можно рекомендовать проводить обучение на обычной скорости, но под счет. На счет «раз» — первый шаг и вынос палок; на счет «два» — толчок другой ногой и постановка палок на снег; на счет «три» — отталкивание палками с одновременным приставлением ноги. Иногда счет заменяют командами «Шаг — шаг!», «Толчок!» Как только ученики освоят движение без грубых ошибок, можно перейти к совершенствованию хода на учебно- тренировочной лыжне, объясняя и показывая ученикам, где лучше применить этот способ передвижения. С первого же занятия по изучению этого хода необходимо приучать учеников делать первый шаг в цикле поочередно с левой и правой ноги. Как только лыжники освоят ход в целом, необходимо обратить их внимание на согласование движений с дыханием. Это необходимо делать и при изучении других одновременных ходов. Толчок выполняется в момент выдоха, при выпрямлении делается вдох. Такая ритмичность усиливает отталкивание и улучшает вентиляцию легких. Хороший эффект при обучении всем одновременным ходам дает применение упражнений игрового характера. Например, на хорошо подготовленной лыжне на расстоянии 25-50 м устанавливаются ворота; задание: кто пройдет отрезок за наименьшее количество циклов одновременного хода? Длина отрезка зависит от изучаемого хода; естественно, при бесшажном ходе он короче. Можно устроить небольшие соревнования: учащиеся проходят по параллельным лыжням (отрезок 50-100 м) на скорость (кто быстрее). Это задание можно давать, если ученики хорошо освоили технику хода. Здесь внимание обращается на силу отталкивания. Недопустимо применение этого упражнения при наличии ошибок в цикле хода.

Расширенное использование одноэтапной методики для одновременного стентирования зоны посадки и размещения транскатетерного легочного клапана Melody

Цели: Мы сообщаем о многоцентровом опыте одновременного стентирования выводного тракта правого желудочка (RVOT) и транскатетерной имплантации клапана легочной артерии с использованием клапана Melody (Medtronic).

Задний план: Презентация ВОПЖ перед имплантацией клапана Melody теперь является стандартом медицинской помощи.Претентирование обычно выполняется как отдельный этап. Ранее сообщалось об «одноэтапном» методе одновременного стентирования посадочной зоны и доставки Melody только с использованием стентов Max LD (Medtronic). Мы сообщаем о многоцентровом опыте одновременного стентирования и имплантации Melody с использованием комбинации нескольких типов стентов.

Методы: Это ретроспективное когортное исследование включает 33 пациента из 3 центров, которым в период с 2017 по 2020 год было выполнено одновременное стентирование и имплантация клапана Melody.Ключевые переменные сравнивались с 31 пациентом из тех же центров, которым было выполнено стандартное (неодновременное) предстентирование с последующей имплантацией Melody в течение того же периода времени.

Результаты: Две группы были схожи по возрасту, массе тела, полу и общему времени процедуры. Две группы имели схожие клинические результаты и профили безопасности, без различий между постимплантационным правым желудочком (ПЖ) и градиентом систолического давления в легочной артерии, соотношением давления в ПЖ и аорте и частотой осложнений.В группе с одновременным облучением наблюдалось более низкое радиационное воздействие, измеренное по произведению дозы на площадь. Одновременно с клапаном Melody безопасно устанавливали до 3 стентов.

Выводы: Одновременное стентирование правого желудочка и имплантацию клапана Melody можно безопасно использовать для размещения до 3 стентов вне клапана Melody. Такой подход может упростить процедуру катетеризации и потенциально снизить дозу облучения.

Ключевые слова: врожденный порок сердца у взрослых; детский врожденный порок сердца; чрескожная клапанная терапия.

Одноэтапная одновременная двухпроводная техника облегчает дренирование псевдокисты и абсцесса поджелудочной железы (с видео)

Задний план: Дренирование псевдокисты и абсцесса поджелудочной железы под контролем ЭУЗИ в идеале требует введения как трансмурального стента, так и назоцистического катетера для обеспечения непрерывной ирригации и эффективного дренирования.Последовательная установка стента и назоцистического катетера может занять много времени из-за сложности реканюляции псевдокисты после первоначальной установки стента.

Цель: Наша цель состояла в том, чтобы описать новую одноэтапную одновременную двухпроводную технику, которая способствует эффективному дренированию псевдокисты и абсцесса поджелудочной железы.

Дизайн: Для решения проблемы реканюляции полости псевдокисты после первичной трансмуральной установки стента мы разработали прототип трехслойного пункционного набора, который позволяет одновременно вводить 2 проводника при первичной пункции за один шаг.Этот набор для пункции состоит из иглы 22G, используемой для FNA, внутреннего политетрафторэтиленового (тефлонового) катетера 6F и наружного тефлонового катетера 8,5F.

Параметр: Третичный реферальный центр.

Пациенты: Пролечено восемь последовательных пациентов.

Вмешательства: С помощью лечебного линейного эхоэндоскопа и собранного комплекта с иглой, выведенной дистально, электрокоагулятором выполнена пунктировка полости псевдокисты. Затем иглу и внутренний катетер извлекали, оставляя внешний катетер в полости. Размер этого наружного катетера позволял одновременно вводить два 0,035-дюймовых проводника.Затем последовательно вводили трансмуральный стент и назоцистический катетер без необходимости реканюляции полости псевдокисты или абсцесса.

Основные показатели результатов: Успешный эндоскопический дренаж.

Результаты: Все пациенты были успешно пролечены без осложнений.Среднее время процедуры составило 32,5 минуты (от 25 до 45 минут).

Выводы: С помощью этой новой техники создание ирригационной системы для лечения псевдокист и абсцессов поджелудочной железы становится проще, быстрее и безопаснее.

Точность одноэтапного и двухэтапного метода оттиска с двойным смешением

Объектив .Исследовать точность штампов, полученных при одноэтапном и двухэтапном оттиске двойного смешения. Материалы и методы . Оттиски (𝑛=10) штампа из нержавеющей стали, имитирующие полное препарирование коронки, были выполнены с использованием полиэфира (Impregum Soft Heavy and Light body) и винилполисилоксана. (Perfectim Blue Velvet и Flexi-Velvet) в двух консистенциях, в один или два (без рельефа) шага. Точность каменных штампов контролировали под измерительным микроскопом с использованием металлического коронка с идеальной посадкой на эталонную препаровку коронки.Данные были представлены для двухфакторного дисперсионного анализа и теста Тьюки (𝛼=0,05). Результаты . Одношаговая техника привела к получению штампов немного большего размера, в то время как двухэтапная техника без рельефа дала значительно меньшие штампы по сравнению с оригинальная матрица из нержавеющей стали. Штампы для камня, полученные из 2-этапных полиэфирных оттисков, были значительно меньше по сравнению со штампами, полученными из 2-этапных винилполисилоксановых оттисков (Impregum 2-этап: −290,94 ± 71,64  мк м; Perfectim 2-ступенчатый: −201.86 ± 28.58  мкс м). Никаких существенных различий не наблюдалось в штампах, полученных из обоих полиэфир или винилполисилоксан одноэтапным методом (Impregum, одностадийный: 63,52 ± 16,60  мкм м; Perfectim, одностадийный: 79,40 ± 14,11  мкм м). Заключение . Более высокие расхождения были обнаружены для двухэтапной методики оттиска без рельефа для исследуемых материалов.

1. Введение

Прогресс в области материалов и разработка методов были необходимы для повышения точности оттисков.Хотя винилполисилоксаны и простые полиэфиры известны своей размерной стабильностью [1, 2], техника оттиска является решающим фактором, влияющим на эту точность [2–10].

В связи с несколькими предложенными протоколами снятия оттисков предпочтительными являются методы двойного смешивания, в которых два материала с различной вязкостью используются вместе [5, 7–9, 11, 12], особенно когда используются полиэфирные и винилполисилоксановые материалы. усыновленный. Одноэтапные или двухэтапные процедуры могут выполняться с замазкой и легкой массой, замазкой и средней массой или тяжелой массой и легкой массой [5, 7–9, 11].

Одноэтапная методика, при которой оба материала полимеризуются одновременно, сокращает время нахождения в кабинете врача и экономит оттискной материал. Несмотря на то, что время является ограничивающим фактором, так как профессионал должен одновременно работать с материалами как с низкой, так и с высокой консистенцией, прежде чем произойдет схватывание, этот метод позволяет получить точные оттиски независимо от кинетики отверждения только материала, введенного шприцем [12]. Согласно литературным данным, одноэтапная методика с винилполисилоксанами или простыми полиэфирами позволяет получить очень точные оттиски [5–7, 11, 13].

При двухэтапной технике для предварительного оттиска используется высоковязкий материал, а для окончательного оттиска используется менее вязкий материал. Несмотря на то, что двухэтапный метод получил широкое распространение и может обеспечить хорошую точность [3, 7, 8], с ним можно экспериментировать с некоторыми проблемами, такими как изменение размеров [5, 12, 13], дополнительное время пребывания в кресле и необходим дополнительный материал [5].

Среди двухэтапных процедур введение техники гидравлического и гидрофобного оттисков [14] открыло новые перспективы для снятия оттисков.Это двухэтапная техника двойной дуги, при которой предварительный оттиск, сделанный с помощью материала высокой консистенции, перебазируется материалом с более низкой консистенцией, оба из которых специально разработаны для выполнения этой техники. В соответствии с этой методикой предполагается, что свойство высокой твердости винилполисилоксана высокой консистенции создает гидравлическое давление, которое продвигает оттискной материал низкой консистенции в борозду и все внутренние аспекты препарирования, устраняя необходимость ретракции тампона. шнур или с помощью прокладок для штампов.

Несмотря на эксплуатационную простоту гидравлической и гидрофобной техники, точность этой техники оттиска требует тщательного изучения. Трехмерные измерения уже показали, что оттиски с двойной дугой приводят к менее точным гипсовым штампикам по сравнению со слепками с индивидуальной ложкой, выполненными с использованием полиэфира или винилполисилоксана [4]. Поэтому интересно проверить, в какой степени сам материал может компенсировать напряжения, возникающие при перебазировке высококонсистентного материала на низкоконсистентный винилполисилоксан.Идрис и др. [11], Ниссан и др. [7, 8], а также Caputi и Varvara [3] продемонстрировали, что двухэтапная техника смывки шпаклевки с использованием винилполисилоксана дает очень точные гипсовые штампы, когда на предварительном оттиске остается рельеф 2 мм. Хунг и др. [5] заметили, что использование пластиковой прокладки на эталонной модели во время предварительного оттиска приводит к получению 2-этапных оттисков, столь же точных, как и при одноэтапной технике. Однако двухэтапная гидравлическая и гидрофобная техника не дает облегчения предварительного оттиска.

Таким образом, целью данного исследования было изучение точности штампов, полученных с помощью одноэтапных и двухэтапных гидравлических и гидрофобных методов, выполненных с использованием различных оттискных материалов. Нулевая гипотеза, которую нужно было проверить, заключалась в том, что не будет существенных различий в точности штампов, полученных из разных материалов или методов оттиска.

2. Материалы и методы

В качестве материалов использовались полиэфир (Impregum Soft; 3M ESPE, Зеефельд, Германия) и винилполисилоксан (Perfectim; J.Morita USA Inc., Ирвин, Калифорния, США). Для получения оттисков штамп из нержавеющей стали, имитирующий препарирование полной коронки (диаметр пришеечной области 8 мм, окклюзионный диаметр 6 мм и высота 8 мм), фиксировали в слепочном устройстве (рис. 1) [15]. Метка на окклюзионной поверхности стального штампа направляла адаптацию металлической коронки с отверстием на окклюзионной поверхности, которое было выровнено по нулевой отметке со стальным штампом (идеальное прилегание).


Перфорированные акриловые цилиндрические лотки (диаметром 12 мм) были прикреплены к нижней части устройства.Стальной штамп, прикрепленный к верхней части штатива, был центрирован в акриловой ванночке для получения оттисков с толщиной материала примерно 2 мм. Это измерялось от расстояния от ложки до края препарирования десны стальной матрицы. Расстояние 2 мм между верхней поверхностью препарата и глубиной ложки сохранялось.

Оттискные материалы смешивали в соответствии с инструкциями производителя при контролируемой температуре (22 ± 1°C) и влажности (55 ± 5%).Соотношение материалов устанавливали по весу на прецизионных весах. Поскольку были исследованы методы двойного смешивания, высококонсистентный (Impregum Soft Heavy Body (ISH), 3M ESPE; Perfectim Blue Velvet (PBV), J. Morita) и низкоконсистентный (Impregum Soft Light Body (ISL), 3M ESPE) Материалы Perfectim Flexi-Velvet (PFV, J. Morita) были адаптированы как для полиэфира, так и для винилполисилоксана. Перемешивание осуществляли на стеклянной пластине металлическим шпателем до получения однородной смеси в течение 30 секунд.

Одноэтапная и двухэтапная методики использовались для получения слепков обоими материалами (рис. 2). Для одноэтапного метода материал высокой консистенции (ISH или PBV) помещали в лоток, в то время как материал низкой консистенции (ISL или PFV) одновременно распределяли по стальной матрице. Для двухэтапной техники был снят предварительный оттиск с использованием материала высокой консистенции (ISH или PBV) и перебазирован продуктом с низкой вязкостью (ISL или PFV). Для имитации гидравлической и гидрофобной техники не применялись распорки или рельеф предварительного оттиска.


Оттиски были отделены от препарата одноосным перемещением через 10 минут и выдержаны при комнатной температуре в течение 2 часов для обеспечения упругого восстановления эластомерных материалов и выделения водорода из винилполисилоксана. Усовершенствованный гипс типа IV (Durone, Dentsply, Petropolis, Rio de Janeiro, Бразилия) в соотношении воды и порошка 0,19 смешивали и заливали в оттиск при механической вибрации. Вокруг лотка была помещена клейкая лента, позволяющая построить цилиндрическое основание высотой 8 мм.Для каждого условия эксперимента (материалы и методы) было изготовлено десять штампов.

Через 2 часа каменный штамп отделяли от оттиска и переносили на штатив измерительного микроскопа (микроскоп для измерения глубины Carl Zeiss 4987926, Zeiss, Йена, Германия). Прилегание металлической коронки к штампам определяло точность размеров образцов по сравнению со стальным штампом. Отверстие на окклюзионной поверхности коронки и границы, установленные на ее краях, стандартизировали ее введение в стальной штамп и в штампик для гипса при постоянной нагрузке 250 g.Окклюзионную поверхность металлической коронки и стального штампа выравнивали до нуля, что считалось эталоном для измерений, полученных в измерительном микроскопе.

Металлическая коронка и матрица располагались перпендикулярно объективу микроскопа для измерения глубины при 160-кратном увеличении (рис. 3). Сначала определяли фокус на окклюзионной поверхности металлической коронки, а микроскоп устанавливали на ноль. Затем определяли фокус на окклюзионной поверхности гипсовой матрицы.Перепад высот между верхней поверхностью каменного штампа и коронкой регистрировали в микрометрах. На каждом образце было выполнено четыре измерения в разграниченных точках тремя независимыми исследователями, и для каждого образца было рассчитано среднее значение. Данные были подвергнуты двустороннему дисперсионному анализу и тесту множественных сравнений Тьюки (𝛼=0,05).


3. Результаты

Одноэтапная методика привела к положительным расхождениям как для простого полиэфира, так и для винилполисилоксана, что указывает на то, что матрицы были немного больше, чем стальные матрицы.С другой стороны, двухэтапный метод дал отрицательные расхождения для обоих материалов, что показало, что в результате этой процедуры были получены меньшие штампы. Значимые различия были обнаружены для оттискных материалов (𝐹df1; 39=17,15; 𝑃=0,0001), техники (𝐹df1; 39=629,16; 𝑃=0,0001) и эффекта взаимодействия (𝐹df1; 39=8,34; 𝑃=0,0065), таким образом отбрасывая нулевые гипотезы. Критерий множественного сравнения Тьюки (𝛼=0,05) был использован для выявления значимых различий между тестируемыми группами (таблица 1).



Группа (𝑛 = 10) Среднее ( μ m) ± SD однородная группировка *
79 .40 ± 14.11
Impergum одностадийный 63.52 ± 16.60
-201.86 ± 28.58 B
Impegegum 2-Stept — 290,94 ± 71,64 в

* Средние значения, за которыми следуют разные буквы, соответствуют значительным различиям.

Штампы для камня, полученные из двухэтапных полиэфирных оттисков, были значительно меньше по сравнению с штампами, полученными из двухэтапных винилполисилоксановых оттисков (Impregum 2-этапный: −290,94 ± 71,64  мкм м; Perfectim 2-этапный: − 201,86 ± 28,58  мкс м). Однородная группировка не выявила существенных различий в штампах, полученных из простого полиэфира или винилполисилоксана одноэтапным методом (одностадийный Impregum: 63,52 ± 16,60  мкм м; одностадийный Perfectim: 79.40 ± 14.11  мк м).

4. Обсуждение

Напряжение, возникающее во время оттиска, является неотъемлемой характеристикой этих материалов. На точность оттисков влияет несколько факторов, таких как направление схватывания, упругое восстановление материала, испарение летучих компонентов или продолжающаяся полимеризация после удаления оттиска. Все эти факторы могут влиять на результаты научных исследований, вызывая изменчивость данных. Хотя высокое стандартное отклонение наблюдалось во всех группах, вариабельность данных в исследованиях оттискных материалов была описана ранее [4, 16] и подчеркивает возможность еще больших расхождений в клинических процедурах.Вариативность могла быть связана с изменением техники измерения или реальными отличиями от эталонной модели в полученных штампах из-за расширения гипса, искажения оттиска или усадки оттискного материала [4].

Оттискной материал оказал значительное влияние на двухэтапную технику в этом исследовании, что также наблюдали Hung et al. [5] и Boulton et al. [2]. Возможно, что высокая твердость винилполисилоксана приводит к снижению невязки двухэтапного метода (с винилполисилоксаном) на 30%, когда тот же метод применялся с полиэфиром.Тем не менее, тип материала для одноэтапных оттисков не дал никакого другого результата. Кажется, что усовершенствование оттискных материалов достигло такой степени, что точность оттисков может контролироваться больше техникой, чем самим материалом [1, 13]. Фактически, это исследование подтверждает, что техника оттиска имеет отношение к точности штампов.

При рассмотрении самой техники снятия оттисков одношаговые оттиски, полученные в этом исследовании, привели к несколько большему размеру штампов, что также наблюдалось в предыдущих исследованиях [3, 6, 12].Обнаруженные расхождения, вероятно, являются результатом неполного упругого восстановления полиэфира и винилполисилоксана [1].

Действительно, наиболее значительные деформации можно ожидать, когда перебазировка выполняется без снятия предварительного оттиска или использования прокладок штампов, как в случае гидравлической и гидрофобной техники. Во время повторной установки ложки смывка вызывает натяжение высоковязкого материала, вызывая тем самым деформацию уже установленного оттиска. После отверждения и удаления материал с высокой консистенцией, вероятно, будет восстанавливаться упруго, возвращаясь в исходное положение [2, 5, 6, 16], что приводит к уменьшению размеров штампов.Это наблюдалось в этом исследовании, а также в исследовании, проведенном Петерсеном и Асмуссеном [9]. Хотя повышенная твердость материала с высокой вязкостью указывает на небольшую гибкость и высокую степень жесткости, которые являются желательными характеристиками оттискного материала, было невозможно избежать изменения размеров винилполисилоксана в двухэтапной технике без рельефа. Кроме того, если на предварительном оттиске не выполняется рельеф, не остается места для стекания промывочного материала, что усложняет восстановление первичного оттиска.

Тип несоответствия может привести к различным клиническим ситуациям. Небольшие положительные несоответствия, такие как наблюдаемые при одноступенчатом методе, приемлемы и могут быть выгодными в некоторых ситуациях, когда более крупные штампы могут компенсировать усадку, возникающую во время литья металла. Слепки точного размера препарирования могут затруднить адаптацию и, следовательно, установить краевые несоответствия. Небольшая положительная погрешность может быть желательной при изготовлении полной коронки, потому что слепок будет немного больше, и коронка с большей вероятностью подойдет.С другой стороны, меньшие штампы могут быть полезны при изготовлении интракоронковых реставраций, когда требуется меньший слепок [4]. Тем не менее, высокие отрицательные расхождения, такие как обнаруженные в этом исследовании при двухэтапном оттиске без рельефа, могут быть клинически неблагоприятными, поскольку ожидается толстая линия цемента. Следовательно, могут возникнуть такие проблемы, как повышенная растворимость или деградация цемента, маргинальная утечка и вторичный кариес.

Были предложены различные альтернативы для сведения к минимуму расхождений, возникающих в результате снятия слепков.Снятие предварительного оттиска, использование спейсеров и наложение пластикового листа поверх предварительного оттиска могут быть хорошими альтернативами для создания достаточного пространства для растекания промывочного материала при двухэтапной технике. На самом деле минимальные изменения размеров наблюдались в гипсовых штампах при выполнении рельефа в предварительном оттиске для двухэтапной техники с аналогичными результатами, полученными при одноэтапном оттиске [5–7, 11]. Одной из альтернатив для получения 1-2 мм свободного места для материала с низкой консистенцией, которого достаточно для получения точных гипсовых штампов, может быть использование временной коронки во время предварительного оттиска из тяжелого материала [3, 8].

Поскольку снятие оттиска является лишь одним из этапов лабораторного протокола, весьма вероятно, что окончательная непрямая реставрация не подойдет должным образом, если будут присутствовать неточности оттиска. Большее несоответствие подразумевает более толстые цементные линии и все связанные с этим проблемы. Таким образом, выбор подходящей техники оттиска важен для получения оптимальных результатов.

Следует подчеркнуть, однако, что представленные здесь данные представляют ограничения исследования in vitro , и желательны дальнейшие клинические исследования.В этом лабораторном исследовании изучалась точность прилегания металлической коронки к гипсовым штампам, изготовленным из одной заготовки в стандартных условиях. В клинической процедуре невозможно исключить влияние поднутрений на соседние зубы и трудно точно контролировать толщину оттискного материала вокруг препарирования. Известно, что оба эти фактора напрямую влияют на точность оттисков [8, 15]. Таким образом, это исследование in vitro предлагает рекомендации для последующих клинических исследований, которые необходимы для подтверждения лабораторных результатов.

5. Выводы

2-этапная техника гидравлического и гидрофобного оттиска привела к значительным расхождениям в гипсовых штампах, когда не выполнялась обработка предварительного оттиска. Одноэтапная техника давала меньшие погрешности в гипсовых штампах, полученных из оттискных материалов, исследованных в этом исследовании, поэтому она предпочтительнее двухэтапного гидравлического и гидрофобного оттиска без рельефа.

Благодарности

Авторы выражают признательность за грант, полученный от PIBIC/CNPq (Programa Institucional de Bolsas de Iniciação Científica do Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico-Brasil) для проведения этого исследования.Они также благодарны А. Я. Фурусе за помощь с иллюстрацией, а также за предоставление оттискных материалов компаниями 3M ESPE и J. Morita.

Одновременная трансплантация печени почки и (двусторонняя) нефрэктомия через срединную линию возможна и безопасна при поликистозе

Abstract

В Eurotransplant 50% одномоментных трансплантаций печени и почек (SLK) выполняются по поводу поликистоза. Классически печень и почку пересаживают в два этапа: печень через подреберный разрез, почку через отдельный косой разрез.Объем печени и почек может усложнить эту «двухэтапную» процедуру, особенно если показана одновременная нативная нефрэктомия. «Одноэтапная» СЛК через мечевидно-лобковую лапаротомию может быть безопасной альтернативой, облегчающей мобилизацию объемной поликистозной печени и нативной нефрэктомии, обеспечивая доступ к подвздошным ямкам для трансплантации почки. Одноэтапные процедуры SLK при поликистозе были введены в августе 2013 г. в IKEM Прага (n = 6) и 11/2014 в университетских клиниках Левена (n = 6).Были исследованы возможности и безопасность одноэтапной методики. Мы сравнили хирургические данные и результаты, полученные с помощью одноэтапной методики, со всеми последовательными двухэтапными процедурами, выполненными по поводу поликистоза в университетских клиниках Лёвена в период с 2008 по 2014 год (n = 23). Дана медиана (межквартильный размах). Одноэтапная SLK предлагала широкую и адекватную экспозицию для гепатэктомии, нефрэктомии и трансплантации, которые прошли без осложнений. Заболеваемость, пациент (100% против 91%, p = 0,53) и выживаемость трансплантата (100% выживаемость трансплантата печени и почки в обеих группах) были сопоставимы между одноэтапной и двухэтапной СЛК.Время холодовой ишемии печени было сопоставимо [6,0 (4,4–7,6) против 7,1 (3,9–7,3), p = 0,077], время холодовой ишемии почек было короче при одноэтапной СЛК по сравнению с двухэтапной [8,1 (6,4–9,3)]. против 11,7 (10,0–14,0), р<0,001)]. Общее время процедуры также было короче при одноэтапной СЛК по сравнению с двухэтапной [6,8 (4,1–9,3) против 9,0 (8,7–10,1), p = 0,032], в то время как всем выполнялась двусторонняя (67%) или односторонняя (33%) ) нефрэктомия (по сравнению с 0% и 52% при двухэтапной СЛК соответственно). При одноэтапной СЛК 67% получили превентивную трансплантацию почки по сравнению с 46% при двухэтапной СЛК.5 из 12 пациентов с двухэтапной СЛК стали зависимыми от диализа после предтрансплантационной нефрэктомии, 4 зависимых от диализа пациентов с одноэтапной СЛК не подвергались нефрэктомии до трансплантации. В заключение, одноэтапная СЛК при поликистозе осуществима и безопасна.

Образец цитирования: Jochmans I, Monbaliu D, Ceulemans LJ, Pirenne J, Fronek J (2017)Одновременная трансплантация печени, почки и (двусторонняя) нефрэктомия через среднюю линию возможна и безопасна при поликистозе. ПЛОС ОДИН 12(3): е0174123.https://doi.org/10.1371/journal.pone.0174123

Редактор: Salvatore Gruttadauria, Istituto Mediterraneo per i Trapianti e Terapie ad Alta Specializzazione, ИТАЛИЯ

Поступила в редакцию: 13 января 2000 г.; Принято: 23 февраля 2017 г .; Опубликовано: 17 марта 2017 г.

Авторское право: © 2017 Jochmans et al. Это статья с открытым доступом, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Все соответствующие данные содержатся в документе и в его файлах вспомогательной информации.

Финансирование: Авторы не получали специального финансирования для этой работы.

Конкурирующие интересы: I. Jochmans и J. Pirenne получили гранты на поездки от коммерческих ресурсов (Astellas, Roche) в поддержку участия в научных конференциях. Это не меняет нашей приверженности политике PLOS ONE в отношении обмена данными и материалами.

Введение

Со времени первого сообщения об одновременной трансплантации печени и почки (SLK) Margreiter et al [1], SLK стала признанным методом лечения терминальной стадии печеночной и почечной недостаточности у взрослых, поскольку было показано, что она обеспечивает хороший трансплантат и исход пациента [2].Поликистоз печени и почек является частым показанием к СЛК [3]. В Eurotransplant 32% СЛК выполнялись по поводу поликистоза в 2004 г., увеличившись до 51% в 2013 г. [4].

Как и первая SLK (R. Margreiter, личное сообщение), трансплантация классически выполняется как двухэтапная процедура с почкой после трансплантации печени. Печень трансплантируют через правый подреберный разрез любой формы, часто через разрез Мерседес, открывающий брюшную полость двусторонним подреберным разрезом с расширением по срединной линии до мечевидного отростка [5].После закрытия кожных покровов пациента обычно повторно драпируют и почку трансплантируют через отдельный левый или правый косой разрез Резерфорда-Морисона или Александра в предбрюшинном пространстве [6]. При поликистозе этот классический двухэтапный метод может быть очень сложным, так как ворота печени расположены более каудально из-за объема печени, а стандартный подреберный разрез не всегда обеспечивает идеальную экспозицию. Кроме того, у этих пациентов часто возникает необходимость в одно- или двусторонней нефрэктомии либо для создания места для почечного трансплантата, либо для удаления любого очага инфекции в почечных кистах, либо из-за боли, вызванной объемом органа.Нефрэктомия, особенно объемных органов, сложна, если выполняется через (двусторонний) подреберный разрез, даже с латеральным расширением разреза, но облегчается срединной лапаротомией.

Альтернативным методом СЛК является одноэтапная процедура, при которой трансплантация выполняется через мечевидно-лобковую лапаротомию и создается предбрюшинный карман для почечного трансплантата. С момента внедрения одноэтапной методики СЛК в Институте клинической и экспериментальной медицины (IKEM) в Праге (08/2013) и университетских клиниках Левена (UZL) в Бельгии (11/2013) все СЛК при поликистозе осуществляется одношаговым методом.Хотя использование срединной лапаротомии при СЛК упоминается в литературе в отдельных случаях [7–9], эта техника никогда не описывалась подробно и не сравнивалась с классическим двухэтапным подходом.

Поэтому мы описываем технику одноэтапной SLK через срединную лапаротомию и сообщаем о возможности, безопасности и результатах процедуры по сравнению с двухэтапным подходом.

Методы

Клинические данные и статистические методы

Данные о донорах, реципиентах, хирургических вмешательствах и последующем наблюдении 12 пациентов, перенесших СЛК путем срединной лапаротомии по поводу поликистозной болезни в ИКЭМ и УЗЛ, были получены из проспективных баз данных.Возникновение хирургических послеоперационных осложнений (Клавиен-Диндо III или выше) в течение 90 дней после трансплантации было получено из историй болезни пациентов. Характеристики и исходы донора, реципиента, трансплантата сравнивали с характеристиками всех (n = 24) последовательных СЛК, выполненных по двухэтапной процедуре по тем же показаниям в УЗЛ в период с 2008 по 2014 гг. В одном случае из 24 последовательных двухэтапных процедур трансплантация почки не следовала сразу за трансплантацией печени, и этот случай был исключен из сравнения.Время процедуры определяли как время от (первого) разреза кожи до закрытия (последней) раны. Непрерывные данные представлены в виде медианы (межквартильный размах), категориальные данные в виде числа (в процентах). Использовались критерий Манна-Уитни U, точный критерий Фишера или критерий Хи-квадрат, значимость считалась p<0,05 (GraphPad Prism 5 для Windows). Пациенты дали письменное информированное согласие на использование их данных в исследовательских целях. Пациенты также давали согласие на использование фотографических изображений. Исследование было одобрено комитетом по медицинской этике УЗЛ (s59327).

Техника двухступенчатого SLK

В исторической группе сравнения все трансплантации выполнялись через билатеральный подреберный разрез после подготовки органов на заднем столе. Печень была имплантирована с использованием замены полой вены, и во всех случаях рутинно использовалось вено-венозное шунтирование. Если во время трансплантации выполнялась нефрэктомия, то ее выполняли в беспеченочную фазу с полным шунтированием пациента. Трансплантация почки следовала за трансплантацией печени как отдельная процедура и выполнялась с почкой либо в левой, либо в правой подвздошной ямке и помещалась в предбрюшинный карман, как описано классически [6].Место имплантации почки определяли до операции, а канюлирование для вено-венозного шунтирования выполняли на контралатеральной стороне предполагаемого места имплантации почки.

Техника одномоментной СЛК через мечевидно-лобковый разрез

Трансплантаты печени и почек были подготовлены для имплантации на заднем столе, как обычно. Брюшную полость вскрыли мечевидно-лобковым разрезом. Обнажению печени способствовало двустороннее краниальное втягивание грудной клетки.Боковая ретракция брюшной стенки обнажает остальную часть живота (рис. 1). Таким образом, печень, собственные почки и обе подвздошные ямки были легко доступны.

Рис. 1. Интраоперационный вид трансплантата печени и почки после одномоментной трансплантации печени и почки с нативной нефрэктомией.

Срединный разрез с краниальной ретракцией ребер, демонстрирующий трансплантат печени (**) и трансплантат почки (*) в правой подвздошной ямке, где от срединной линии был создан предбрюшинный карман (°).Этот карман закрывается путем взятия брюшины швами, закрывающими среднюю линию.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0174123.g001

Трансплантация печени затем следовала обычному курсу либо с классической техникой замещения полой вены (УЗЛ, как описано выше) с рутинным использованием вено-венозного шунтирования, либо контрейлерная техника (IKEM) без использования временного портокавального шунта. Если выполнялась нефрэктомия, то это делалось либо во время беспеченочной фазы, либо после реперфузии печени (таблица S1).

Почечный трансплантат помещают в предбрюшинный карман (15х15см). Этот карман можно создать, отслаивая брюшину от срединной линии (рис. 1) или из отдельно выполненного L-образного разреза брюшины (рис. 2). После создания этого кармана препарируют подвздошные сосуды (рис. 3) и мочевой пузырь и трансплантируют почку по классической методике. Отслоившуюся брюшину ушивают либо путем уведения ее в швы, закрывающие лапаротомию, либо путем закрытия Г-образного разреза отдельно.

Рис. 2. Интраоперационный вид подвздошной ямки после создания предбрюшинного лоскута.

Обнажение подвздошных сосудов через разрез по срединной линии после создания и краниальной ретракции брюшинного лоскута (°), в данном случае созданного путем отслаивания его от срединной линии.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0174123.g002

Рис. 3. Иллюстрация и интраоперационный вид, показывающий доступ к L-образному разрезу для создания предбрюшинного лоскута.

Альтернативный вариант создания предбрюшинного кармана для почечного трансплантата, начиная с отдельного Г-образного разреза брюшины, который позже откидывается и закрывается отдельно после трансплантации почки.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0174123.g003

Результаты

Одноэтапный подход для SLK при поликистозе был внедрен в UZL после наблюдения за техникой в ​​IKEM, где она используется с августа 2013 года. Между этими датами и 06/2016 было выполнено 12 случаев со средним периодом наблюдения 373 дня (120–684) (6 IKEM, 6 UZL).В каждом случае была получена широкая и адекватная экспозиция при гепатэктомии, нефрэктомии и трансплантации, которые прошли без осложнений. Восемь одноэтапных СЛК сопровождались двусторонней нефрэктомией, в остальных четырех случаях выполнялась односторонняя нефрэктомия (которая у двух пациентов последовала за предшествующей нефрэктомией) (табл. 1). Создание предбрюшинного кармана при одномоментной СЛК не вызвало затруднений и не было скомпрометировано нефрэктомией нативной почки.

В таблице 2 показаны демографические данные доноров, реципиентов, операции и результаты одноэтапных и двухэтапных процедур СЛК.Таблица S1 показывает всю информацию по каждому пациенту. Различий в возрасте донора и реципиента, гендерном распределении и индексе массы тела (ИМТ) не было. Показатель модели конечной стадии заболевания печени (MELD) был немного, но не статистически, ниже у пациента, перенесшего срединную лапаротомию, хотя медиана MELD была аналогичной. Предоперационная потребность в переливании продуктов крови была одинаковой при одноэтапной и двухэтапной СЛК (табл. 2).

Время холодовой ишемии печени было сопоставимо при одноэтапной и двухэтапной СЛК (табл. 2).Время холодовой ишемии почки и общее время процедуры были в среднем на 3,6 ч и 2,2 ч короче при одноэтапной СЛК, в то время как 67% из них перенесли двустороннюю нефрэктомию и 33% одностороннюю нефрэктомию (по сравнению с 0% и 48% соответственно). в двухступенчатой ​​СЛК соответственно) (табл. 2).

В когорте одноэтапной SLK 67% пациентов были превентивно трансплантированы по сравнению с 46% в когорте двухэтапной SLK (p = 0,30). Из 11 пациентов, находящихся на диализе во время двухэтапной СЛК, 5 стали зависимыми от диализа после предшествующей нефрэктомии, в то время как 4 пациента на диализе во время одноэтапной СЛК не подвергались нефрэктомии до трансплантации (таблица S1).

Все пациенты выздоровели, и все трансплантаты сразу заработали. Возникновение хирургических осложнений III степени и выше по Clavien-Dindo в течение 90 дней после трансплантации было сходным при одноэтапной и двухэтапной СЛК (табл. 3). Возникли три стриктуры анастомозов (2 одноэтапных, 1 двухэтапная), которые были устранены с помощью эндоскопической ретроградной холангиографии или чрескожной чреспеченочной холангиографии и стентирования. Одна утечка мочеточника была устранена стентированием мочеточника после одноэтапной СЛК.Свищ поджелудочной железы возник после одноэтапной СЛК у пациента, перенесшего тотальную гастрэктомию в анамнезе, когда во время гепатэктомии произошел небольшой разрыв поджелудочной железы. Фистула была дренирована хирургическим путем. Продолжительность пребывания в отделении реанимации и стационаре была одинаковой при одноэтапной и двухэтапной СЛК. Во время наблюдения после одноэтапной SLK послеоперационные грыжи не развились по сравнению с 4/23 при двухэтапной SLK при медиане наблюдения 382 дня (172–678). Исход пациента и трансплантата был сходным при одноэтапной и двухэтапной процедуре (таблица 1) с 2 смертельными исходами пациентов при двухэтапной СЛК (одна ранняя смерть из-за инвазивного аспергиллеза, одна 2.5 лет после трансплантации в результате недавно развившейся немелкоклеточной карциномы легкого.

Обсуждение

Эта ограниченная серия показывает, что одноэтапная SLK через срединную лапаротомию для SLK при поликистозе осуществима и безопасна по сравнению с классической двухэтапной процедурой.

Заболеваемость и смертность были сопоставимы между одноэтапными и двухэтапными процедурами, но более короткое время холодовой ишемии почки и время процедуры были достигнуты при одноэтапной СЛК, хотя во всех случаях одно- или двусторонняя нефрэктомия выполнялась во время одноэтапной СЛК. шаг СЛК.Сокращение времени операции, вероятно, связано с комбинацией факторов, среди которых тот факт, что делается только один разрез и только один необходимо закрыть. Другие логистические факторы, т.е. открытие новых наборов простыней и инструментов, повторное покрытие пациента … также может повлиять на время процедуры.

Во всех случаях была выполнена (двусторонняя) нефрэктомия либо для создания пространства для почечного трансплантата, либо для удаления любого потенциального очага инфекции, либо для облегчения симптомов боли или осложнений геморрагической кисты.Срединный доступ при одноэтапной СЛК облегчил экспозицию, и нефрэктомии были выполнены без осложнений. Нефрэктомия не нарушила формирование предбрюшинного кармана.

Нефрэктомия также может быть выполнена во время двухэтапной процедуры, но это часто бывает затруднительно. Правосторонняя нефрэктомия может быть выполнена во время трансплантации печени через подреберный разрез, и это часто делается (как это было у 11/23 пациентов с двухэтапной СЛК). Тем не менее, это может быть сложной задачей, особенно если орган объемный.Выполнение левосторонней нефрэктомии при трансплантации печени через подреберный разрез еще более затруднительно, даже при левостороннем расширении разреза, и это было выполнено только один раз у пациентов с двухэтапной СЛК. Одно- или двусторонняя нефрэктомия может быть выполнена независимо от трансплантации через срединную лапаротомию (т.е. до или после СЛК, в зависимости от показаний и характеристик пациента, как это было сделано в 9/23 случаях двухэтапной СЛК), подвергая пациента повышенному хирургическому вмешательству. риски.Если нефрэктомия выполняется до трансплантации, существует значительная вероятность того, что пациент станет зависимым от диализа, если уже не от заместительной почечной терапии. Кроме того, как недавно было описано для трансплантации почки живого донора с одновременной двусторонней нефрэктомией по поводу поликистоза, комбинированный оперативный подход позволяет избежать нескольких процедур, диализа и затрат на поэтапные операции [10].

Хотя трансплантат и выживание пациента являются наиболее важными исходами, послеоперационные осложнения, такие как боль, раневые инфекции, послеоперационная грыжа и эвисцерация, усложняют восстановление и увеличивают затраты.Любой хирургический разрез должен обеспечивать доступ и экспозицию, минимизируя болезненность. В плановой хирургии поперечные разрезы вызывают меньшую боль, раневые инфекции, послеоперационные грыжи и легочную дисфункцию [11]. Поскольку популяция трансплантатов более склонна к любому из этих заболеваний, привлекательными являются поперечные разрезы. Тем не менее, нет литературы о боли и функциональном восстановлении после двух поперечных разрезов (в данном случае подреберного для печени и косого разреза в подвздошной ямке для почки), особенно в популяции хрупких трансплантатов с ослабленным иммунитетом.Кроме того, когда эти разрезы находятся справа, пересечение верхних и нижних надчревных пучков нарушает васкуляризацию мышц и кожи. Размещение почки слева позволит избежать этого, но множество факторов определяют место имплантации и не всегда благоприятствуют левой ямке.

Срединные послеоперационные грыжи, хотя, возможно, и более частые, легче поддаются пластике, так как в случае рецидива доступно больше вариантов. Кроме того, неукоснительное соблюдение новейших рекомендаций по ушиванию брюшной стенки (однослойные, непрерывные медленно рассасывающиеся швы, соотношение длины шва к длине раны, равное четырем или более, и короткая длина стежка), вероятно, снизит частоту послеоперационных грыж [12, 13].Мы не наблюдали увеличения частоты послеоперационных грыж или эвисцерации после срединной лапаротомии по сравнению с пациентами, которым была выполнена двухэтапная SLK, хотя последующее наблюдение при одноэтапной SLK было короче, и послеоперационные грыжи все еще могли развиваться.

Предбрюшинное положение почечного трансплантата позволяет проводить биопсию под ультразвуковым контролем с меньшим риском внутрибрюшного кровотечения или повреждения кишечника. Вот почему мы помещаем почку в предбрюшинный карман во время одноэтапной СЛК.Мы обнаружили, что создание предбрюшинного кармана является элегантной техникой при других интраабдоминальных одновременных трансплантациях, таких как поджелудочная железа-почка и тонкая кишка-почка.

Двухэтапный подход остается особенно интересным, когда ожидается гемодинамическая нестабильность, нарушения свертывания крови и т. д., и в этом случае трансплантацию почки можно отложить на несколько часов, пока состояние пациента не станет более стабильным. Другим показанием может быть положительная перекрестная совместимость или высокосенсибилизированный реципиент, когда отсрочка трансплантации почки дает печени время поглотить циркулирующие антитела [14].Эти условия не обязательно известны во время разреза, но срединная лапаротомия не обязывает хирурга к SLK при одноэтапном подходе. Операцию можно начать, ограничив срединную лапаротомию уровнем пупка и расширив ее до лобка, как только будет принято окончательное решение о пересадке почки. Если команда сочтет, что пересадку почки лучше отложить на несколько часов, можно сделать последовательный разрез классической хоккейной клюшкой.

Можно задаться вопросом, можно ли использовать SLK по средней линии для других показаний, кроме поликистозной болезни, поскольку мы действительно выполнили один случай SLK для алкогольного цирроза печени с зависимой от диализа хронической почечной недостаточностью у пациента без ожирения с хорошей экспозицией.Хотя в литературе нет данных, этот метод может не принести большой пользы у пациентов с ожирением или без асцита.

Поскольку группа сравнения состояла только из пациентов с УЗЛ, существуют различия в периоперационном уходе и логистике, которые могли повлиять на результаты. Хотя обе группы имели сопоставимые исходные характеристики, эти ограничения необходимо учитывать при интерпретации этих данных, и эти первоначальные результаты должны быть подтверждены в более крупных сериях и, в идеале, в рандомизированном контролируемом исследовании.

Заключение

Срединный доступ для SLK при поликистозе обеспечивает осуществимый и безопасный доступ с превосходной экспозицией и может сочетаться с одно- или двусторонней нефрэктомией, потенциально избегая заместительной почечной терапии перед трансплантацией. Кроме того, этот метод сокращает время процедуры и время холодовой ишемии почек. Предбрюшинное размещение почки легко осуществляется путем отслаивания брюшины от срединной линии или отдельного L-образного разреза брюшины. Однако для проверки этих первоначальных результатов необходимы более проспективные данные о заболеваемости различных хирургических подходов к СЛК при поликистозе и других показаниях.

Вклад авторов

  1. Концептуализация: IJ JP JF.
  2. Обработка данных: IJ.
  3. Формальный анализ: IJ.
  4. Расследование: IJ DM LJC JP JF.
  5. Методология: IJ.
  6. Администрация проекта: IJ.
  7. Ресурсы: IJ DM JP JF.
  8. Надзор: IJ.
  9. Валидация: IJ.
  10. Визуализация: IJ JP JF.
  11. Письмо – первоначальный вариант: IJ.
  12. Написание – рецензирование и редактирование: IJ DM LJC JP JF.

Каталожные номера

  1. 1. Маргрейтер Р., Крамар Р., Хубер С., Штайнер Э., Нидервизер Д., Юдмайер Г. и др. Комбинированная трансплантация печени и почки. Ланцет. 1984; 1 (8385): 1077–8. Эпб 1984/05/12.
  2. 2. Надим М.К., Сунг Р.С., Дэвис С.Л., Андреони К.А., Биггинс С.В., Данович Г.М. и др.Саммит по одновременной трансплантации печени и почки: текущее состояние и перспективы. Ам Джей Трансплант. 2012;12(11):2901–8. Эпб 2012/07/25. пмид:22822723
  3. 3. Coquillard C, Berger J, Daily M, Shah M, Mei X, Marti F и др. Комбинированная трансплантация печени и почек при поликистозе печени и почек: анализ из набора данных United Network for Organ Sharing. Liver international: официальный журнал Международной ассоциации изучения печени. 2016;36(7):1018–25.Эпаб 15.12.2015.
  4. 4. Международный фонд Евротрансплант. Отчет данных x15_265. Доступно по адресу:statistics.eurotransplant.org.
  5. 5. Клинтмальм Г.Б., Бусуттил Р.В. Реципиент Гепатэктомия и трансплантация. В: Busuttil RW, Klintmalm GB, редакторы. Трансплантация печени: Эльзевир; 2015. с. 600–10.
  6. 6. Уотсон CJE, друг PJ. Хирургические методы пересадки почки. В: Morris PJ, Knechtle SJ, редакторы. Принципы и практика трансплантации почки.7-е издание: Elsevier; 2014. с. 161–75.
  7. 7. Демирци Г., Беккер Т., Нибата М., Люк Р., Бектас Х., Ленер Ф. и др. Результаты комбинированной и последовательной трансплантации печени и почки. Трансплант печени. 2003;9(10):1067–78. пмид:14526402
  8. 8. Руис Р., Кунитаке Х., Уилкинсон А.Х., Данович Г.М., Фармер Д.Г., Гобриал Р.М. и соавт. Долгосрочный анализ сочетанной трансплантации печени и почки в одном центре. Арка Сур. 2006;141(8):735–41; обсуждение 41–2. пмид:16924080
  9. 9.Бенедетти Э., Пиренн Дж., Тропманн С., Хаким Н., Мун С., Грусснер Р.В. и др. Комбинированная трансплантация печени и почки. Транспл Интерн. 1996;9(5):486–91. пмид:8875792
  10. 10. Ахмад С.Б., Иноуе Б., Фелан М.С., Крамер А.С., Сулек Дж., Вейр М.Р. и др. Трансплантация почки от живого донора с одновременной двусторонней нефрэктомией при аутосомно-доминантном поликистозе почек возможна и удовлетворительна при длительном наблюдении. Трансплантация. 2016;100(2):407–15. Эпб 2015/08/12. Центральный PMCID PubMed: PMCPMC4896313.пмид:26262506
  11. 11. Браун С.Р., Гудфеллоу П.Б. Поперечные срединные разрезы для абдоминальной хирургии. Cochrane Database Syst Rev. 2005;(4):CD005199.
  12. 12. Muysoms FE, Antoniou SA, Bury K, Campanelli G, Conze J, Cuccurullo D, et al. Рекомендации Европейского общества герниологов по закрытию разрезов брюшной стенки. Грыжа. 2015;19(1):1–24. Эпб 2015/01/27. пмид:25618025
  13. 13. Deerenberg EB, Harlaar JJ, Steyerberg EW, Lont HE, van Doorn HC, Heisterkamp J, et al.Небольшие укусы в сравнении с большими укусами для закрытия разрезов по средней линии живота (STITCH): двойное слепое, многоцентровое, рандомизированное контролируемое исследование. Ланцет. 2015;386(10000):1254–60. Эпаб 21.07.2015. пмид:26188742
  14. 14. Олауссон М., Мьорнштедт Л., Норден Г., Ридберг Л., Молне Дж., Бэкман Л. и др. Успешная комбинированная частичная вспомогательная трансплантация печени и почек у высокосенсибилизированных перекрестно-положительных реципиентов. Ам Джей Трансплант. 2007;7(1):130–6. Эпублик 18.01.2007. пмид: 17227562

Цитохимия ферментов | Центральный исследовательский центр микроскопии

Цитохимия ферментов идентифицирует фермент внутри ткани или типа клетки с помощью специфической реакции субстрата, в результате которой появляется видимый маркер.

Субстрат — вещество, на которое действует фермент.

Улавливающий агент – связывается с субстратом и содержит видимый продукт реакции, такой как тяжелый металл или окрашенный продукт реакции.

Ферменты можно классифицировать по их методу демонстрации.

A. Одновременный захват описывает процедуру, при которой реагент в инкубационной среде соединяется с продуктом реакции. Примером этого метода является диазометод щелочной фосфатазы.

B. Постинкубационное связывание основано на получении нерастворимого продукта реакции, который затем соединяется с окрашенным или непрозрачным веществом. Рутенбург и Селигман для кислой фосфатазы являются примером.

C. Реакция самоокрашиваемого субстрата получается, когда водорастворимый краситель становится нерастворимым из-за удаления гидрофильной группы ферментом. Затем в месте активности фермента образуется окрашенный осадок.

D. Внутримолекулярная перегруппировка приводит к образованию окрашенного нерастворимого соединения в местах ферментативной активности бесцветного субстрата.

Ферментативные реакции часто сочетают с иммунохимическими методами.

Иммунохимические методы

Иммуноцитохимия или иммуногистохимия – это идентификация тканевого компонента (белка, липополисахарида и т. д.) in situ с помощью специфической реакции антиген/антитело, помеченной видимой меткой. иммуногистохимия обычно относится к обнаружению на уровне света, а иммуноцитохимия обычно относится к обнаружению с разрешением ЭМ.

Антиген представляет собой представляющий интерес белок или мишень.Антитело — это структура, созданная иммунной системой для поиска и связывания определенного антигена. Антиген состоит из множества сегментов, называемых эпитопами. Эпитоп представляет собой область, которая будет связываться с антителом.

Из-за особой взаимосвязи между антигеном и антителом необходимо соблюдать осторожность, чтобы гарантировать, что ни один из них не будет изменен до неузнаваемости его аналогом, и в то же время сохранить целостность ткани или клетки, в которой находится антиген.

Структура антитела

Общая структура антитела имеет Y-образную форму.Комбинирующие (или реактивные) участки расположены на концах двух плеч. Структура этих двух концов варьируется от одного антитела к другому. Третья область не участвует в связывании антигена. Реактивные участки антитела образованы четырьмя полипептидными цепями, связанными мостиками между серосодержащими аминокислотами. Пара идентичных легких цепей связана с парой тяжелых цепей.


Рисунок 1: Схематическая модель молекулы иммуноглобина.

Структуры антител представляют собой сложные многоцепочечные белки, которые имеют одинаковую общую форму, но каждый из них имеет уникальные области, которые способствуют связыванию с одним антигеном, а не с другим.Скручивание цепей антител создает щели и впадины, которые соответствуют форме антигена, так что слабые межмолекулярные силы могут связывать антиген с антителом.

Типы антител:

A. Моноклональные антитела — это антитела, специфичные только к одному антигенному сайту.
B. Поликлональные антитела представляют собой смесь антител, каждое из которых специфично для определенного эпитопа одного и того же антигена.

Типы иммунного мечения:

A. Метод прямого мечения требует только одного этапа, на котором специфическое антитело образует комплекс непосредственно с видимым маркером.


Рисунок 2: Схематическое изображение прямой маркировки.

B. Непрямое мечение представляет собой двухэтапный метод, в котором используется антитело, специфичное к антигену, и вторичное антитело, связанное с видимым маркером.


Рисунок 3: Схема непрямой маркировки.

C. Множественное мечение (также называемое двойным или тройным мечением и т. д.) относится к одновременной локализации двух или более разных антител. Очевидно, необходимо использовать разные маркеры для каждого антитела.

Специальные маркеры:

A.Флуоресцентные зонды могут быть использованы для определения локализации антигена на уровне света. С изобретением лазерного сканирующего конфокального микроскопа этот метод стал особенно мощным и относительно простым.
B. Частицы золота в настоящее время являются наиболее популярными метками для иммуноокрашивания с помощью электронной микроскопии и все чаще используются также при освещении. Частицы незаметны в электронном микроскопе, и их трудно перепутать. Они бывают разных размеров для двойной маркировки.В световом микроскопе для визуализации необходимо использовать технику увеличения серебра. Эпиполяризующий фильтр улучшает обнаружение метки тяжелых металлов.
C. Пероксидаза хрена (HRP) представляет собой ферментную метку, прикрепленную к иммуноглобулину с целью использования каталитических свойств фермента для образования нерастворимого продукта реакции.
D. Другими ферментными маркерами являются щелочная фосфатаза, бета-галактозидаза и оксиды глюкозы. Этим ферментам, как и HRP, требуется хромоген (обычно диаминобензидин, DAB или 3-амино-9-этилкарбазол, AEC).

Механизмы усиления:

A. Гибридное связывание достигается путем конструирования молекулы IgG из двух разных частей Fab антитела, одна из которых направлена ​​против антигена, а другая против метки.



Рисунок 4: Fab- и Fc-фрагменты антитела могут быть ферментативно разделены для гибридного связывания или очень специфического непрямого мечения.

B. Белок A или G может быть помечен на Fc (нереактивной части) IgG, оставляя оба реактивных сайта свободными для связывания с антигеном.


Рис. 5: Схема белка А.

C. Усиление серебром может быть выполнено, когда частица золота слишком мала, чтобы ее можно было увидеть, например, в процедуре предварительной заливки или при наблюдении за уровнем освещенности. Серебро будет энуклеировать золотую частицу.


Рисунок 6: Серебряное усиление золота.

d или в качестве альтернативы PCR
Рисунок 7: Схема усиления сигнала тирамидом.

Enzyme Controls:

A. Положительный контроль следует использовать, когда это возможно, параллельно с тестовыми срезами, чтобы продемонстрировать жизнеспособность реагента.

B. Отрицательный контроль можно легко получить, разрушив активность фермента в положительном контроле путем погружения в кипящую воду на 15 минут или с помощью специального химического метода для демонстрации фермента.

C. Полезным контролем является инкубация одной из испытуемых секций в реакционной смеси без субстрата в течение того же времени, что и тестовые образцы.Оба раздела проходят остальную часть техники вместе.

Иммуноконтроль:

Все эксперименты следует проводить с серией контролей, проводимых одновременно. К любому «положительному» результату следует относиться скептически, пока не будут проанализированы все контроли.

A. Адсорбция. Первичное антитело реагирует с избытком антигена. Этот контроль показывает, что именно антиген, а не какое-либо другое вещество отвечает за наблюдаемую локализацию. Абсорбированный раствор не должен реагировать с антигеном в протоколах локализации.

B. Метка или немеченое антитело. Они используются отдельно вместо конъюгированного антитела. Этот контроль определяет, что за локализацию ответственны специфические свойства меченого антитела.

C. Отсутствие первичных или вторичных антител. Если в этих условиях наблюдается маркировка, то это не маркировка, предполагаемая в результате взаимодействия антитело/антиген.

D. Использование предиммунных сывороток . Сбор сыворотки перед получением первичной антисыворотки, используемой вместо первичного антитела, будет положительным, если за связывание отвечает какой-либо компонент иммунной сыворотки, отличный от специфического IgG.Обычно невозможно получить предиммунную сыворотку от одного и того же животного, но можно использовать нормальную сыворотку того же вида.

Подготовка образцов
Для ферментов

Большинство ферментов требуют, чтобы ткани были максимально свежими. Фиксаторы, если они могут быть использованы, должны быть охлаждены в холодильнике, чтобы сохранить как можно больше ферментативной активности.

Некоторыми распространенными реакциями, которые не выдерживают фиксации, являются кислая и щелочная фосфатазы и эстеразы.Ферменты не выживают при температуре выше 55 градусов Цельсия.

Для иммунных реакций До и после заливки

A. Проблемы перед заливкой

1. Маркировка клеточной поверхности перед фиксацией

a. Замороженные секции
b. Срезы вибратома

2. Пермеабализация может быть необходима для проникновения, но обычно приводит к плохой морфологии.

а. Замораживание/оттаивание
b. Моющие средства (Сапонин, Тритон-Х)
c. ДМСО

Предварительное встраивание Иммунологическая маркировка

7
1.Требуется время 2-3 дня 2-3 дня
2. Раздел Easy
3. Маркировка возможна по всему разделу
4. Серийные разделы Easy
5. Хранение Блоки и профили легкие
6. Оборудование Обычное в ЭМ лаборатории
7. Недостатки Потеря структуры, перемещение с пермеабализацией
7 9.Иммуномаркировка после встраивания позволяет лучше контролировать морфологию

1. Фиксация позволяет хранить
2. Среда для встраивания может маскировать антигены
3. Фиксация изменяет структуры белков

a. Может потребоваться травление или демаскирование
b. Варианты фиксации для иммунореакций

Целью фиксации является стабилизация клеточного компонента в его естественном положении.

1. Химическая фиксация обеспечивает хорошую морфологию, но может поставить под угрозу антигенность и/или ферментативную активность

a.Дот-иммунореактивный тест может помочь определить антигенность (Приложение B) 90–104 b. Сверхфиксированные ткани могут реагировать на методы восстановления эпитопов (Приложение E)

2. Физическая фиксация может сохранить целостность антигена, но за счет морфологии. Для многих ферментативных методов могут потребоваться замороженные образцы.

а. Чтобы свести к минимуму повреждение кристаллов льда, используется криозащитное средство.

  • сахароза
  • ДМСО
  • глицерин
  • среда для заливки

C.Другие условия для оптимизации реакций

  1. pH
  2. Концентрация антитела и/или субстрата
  3. Концентрация улавливающего реагента
  4. Температура (ферменты обычно не выживают при температуре выше 55 градусов Цельсия)
  5. Время реакции или фиксации
2 4
  • Блокирующие реагенты можно использовать для блокировки фонового окрашивания из-за перекрестной реактивности или полиспецифичности.

    Близкородственные антигены, молекулярная форма и распределение заряда которых могут быть сходны с исходным антигеном и могут соответствовать одному и тому же антителу.Говорят, что они перекрестно реагируют.

    Рисунок 8. Два антитела перекрестно реагируют с родственным антигеном (DNP)

    Известно также, что очень разные антигены связываются с одним антителом, тесными контактами краев антигена и аминокислотными участками, образующими стенки участка связывания антитела может вызвать его связывание. Эта особенность называется мультиспецифичностью.

    Рис. 9. Реакция одного и того же антитела с двумя очень разными антигенами (мультиспецифичность).

    Рекомендации по началу проекта иммуноцитохимии

    Приложения

    Сверхчувствительное обнаружение Mycobacterium tuberculosis с помощью быстрой и специфической одноэтапной, запускаемой зондом, одновременной гибридизации ДНК и изотермической амплификации в сочетании с индикаторной полоской с боковым потоком

    и подготовка ДНК

    Этот проект получил одобрение Институционального наблюдательного совета (IRB ) медицинского факультета больницы Сирирадж Университета Махидол с документом Комитета по этике №603/2555. Исследования проводились в соответствии с соответствующими руководящими принципами и правилами, предписанными вышеуказанными организациями. Анонимизированные остаточные осадки мокроты от пациентов без туберкулеза и больных туберкулезом из различных коллекций в Таиланде использовались с информированного согласия, полученного от всех участников. Все образцы мокроты были обработаны в соответствии со стандартным методом N-ацетил-L-цистеин-цитрат натрия-NaOH (NALC-NaOH) для расщепления, обеззараживания и концентрирования 26 . Концентрированные осадки ресуспендировали в 1 мл 0.85% солевой раствор. Обеззараженные образцы мокроты (500 мкл) однократно промывали Трис-ЭДТА (ТЭ) буфером (рН 8,0). Супернатант из каждого образца удаляли, а осадок ресуспендировали в 500 мкл ТЕ-буфера перед переносом в 1,5-мл микроцентрифужную пробирку, содержащую 0,4 мл силиконизированных стеклянных шариков. Клетки разрушали энергичным встряхиванием в течение 10 минут при комнатной температуре с последующим кипячением в течение 20 минут. Клеточный дебрис удаляли центрифугированием при 12 000 ×  g в течение 2 минут при 4 °C и собирали супернатант.ДНК осаждали, добавляя 5 М NaCl и 2,5 объема абсолютного этанола. Осадок ДНК собирали, один раз промывали охлажденным льдом 70% этанолом и ресуспендировали в 20 мкл буфера TE 27 . Эти образцы использовались для оценки надежности нашего недавно разработанного анализа обнаружения Mtb (см. ниже).

    Чтобы подготовить образцы ДНК для оптимизации анализа, полученная из мокроты Mtb -ДНК, полученная из больницы Siriraj, Бангкок, Таиланд, была подвергнута количественному и качественному анализу с использованием спектрофотометра при 260 и 280 нм.Раствор ДНК серийно разбавляли в десять раз для приготовления исходных растворов, содержащих 50 нанограмм (нг) — 5 аттограмм (мкг)/мкл в воде, не содержащей ДНКазы. Во всех экспериментах использовали два микролитра матрицы, если не указано иное.

    Конструирование рекомбинантной плазмиды

    Рекомбинантная плазмидная ДНК была сконструирована в соответствии с нашим протоколом, описанным ранее 14 . Вкратце, полная последовательность гена Mtb -IS 6110 , экспрессируемая исключительно в членах комплекса Mycobacterium tuberculosis , была амплифицирована с помощью ПЦР с использованием прямого праймера F (5′-GCATGTCCGGAGACTCCA-3′) и обратного праймера R (5′-GCATGTCCGGAGACTCCA-3′). ‘-GTGAGTCCGGAGACTCTC-3’), что дает ПЦР-ампликон длиной 1330 п.н.После лигирования продукта ПЦР в плазмиду pGEM-T Easy Vector (Promega, Мэдисон, США) в соответствии с протоколом производителя рекомбинантную плазмиду трансформировали в 100 мкл компетентных клеток JM109 Escherichia coli с последующим отбором бело-голубых колоний и подтверждением с помощью ПЦР, используя метод, описанный выше. Положительные колонии культивировали в течение 16 ч в 2 мл бульонной среды LB, содержащей 100 мг/мл ампициллина. Плазмидную ДНК очищали с использованием системы очистки ДНК Wizard Plus SV Minipreps (Promega, Мэдисон, США) с последующим спектрофотометрическим анализом при 260 и 280 нм.Плазмиду серийно разбавляли в десять раз для приготовления исходных растворов, содержащих 5 × 10 7 –0,5 копий/мкл. Два микролитра матрицы использовали в оптимизированной реакции LAMP-LFD .

    Разработка и оптимизация праймеров LAMP

    Праймеры LAMP, включая внешние праймеры (F3, B3), внутренние праймеры (биотинилированные FIP, BIP) и петлевые праймеры (LF, LB), были разработаны в соответствии с опубликованными последовательностями Mtb — Ген IS 6110 (инвентарный номер GenBank X17348) с использованием Primer Explorer версии 4 (таблица 1).Для анализа LFD использовались два типа зондов. Первый зонд был помечен FITC на 5′-конце и назван «обычным зондом». Второй зонд был помечен FITC и dSpacer на 5′- и 3′-концах соответственно. Последний был недавно исследован в этом исследовании и назван «модифицированным зондом». Оба были сконструированы из последовательности ДНК между областями F1 и B1 (рис. 2А). Поскольку наш модифицированный зонд является новым, конкретные критерии его конструкции не установлены. Таким образом, он был создан на основе критериев для типичных праймеров праймеров PCR и LAMP, а также LFD-зондов рекомбиназной полимеразной амплификации (RPA) 28 следующим образом: (1) зонды обычно имеют длину 18–22 н., (2 ) Избегают палиндромных и повторяющихся последовательностей, которые могут образовывать шпильки внутри последовательности зонда, и (3) предпочтительны гуанин и цитозин на 3′-конце, поскольку они обеспечивают более стабильное связывание с последовательностью-мишенью.Все праймеры и зонды были синтезированы компанией Bio Basic, Канада. Дальнейший анализ выявил возможную перекрестную реактивность среди них (рис. 2B). Это привело к вопросу о том, может ли возможное перекрестное связывание вызывать самоамплификацию/ложноположительные результаты в анализах LAMP-AGE/LFD. Если ответ «да», можно ли изменить метод, чтобы предотвратить это? Для ответа на эти вопросы были проведены тесты.

    Чтобы определить оптимальные условия (температура и время) для амплификации ДНК, реакции LAMP были проведены в соответствии с нашим опубликованным протоколом LAMP 14 с небольшими изменениями компонентов реакции.Вкратце, исходная реакционная смесь LAMP содержала по 2 мкМ каждого из внутренних праймеров (меченых биотином FIP и BIP), по 0,4 мкМ каждого из петлевых праймеров (LF и LB), по 0,2 мкМ каждого из внешних праймеров (F3 и B3), 1,4 мМ Смесь dNTP (New England Biolabs, Массачусетс, США), 0,6 М бетаина (Sigma-Aldrich, Миссури, США), 4 мМ MgSO 4 (NEW England Biolabs, Массачусетс, США), 8 U Bst 2,0 ДНК-полимеразы ( New England Biolabs, Массачусетс, США), поставляемый 1X буфер и указанное количество матричной ДНК в конечном объеме 20 мкл.Реакции LAMP без ДНК были включены в качестве отрицательного контроля. Для оптимизации температуры реакции LAMP проводили с использованием термоциклера SimpliAmp (Thermo Fisher, США) при 60, 63 и 65 °C в течение 1 ч с последующей инактивацией нагреванием при 90 °C в течение 2 мин. После амплификации 5 мкл продукта LAMP визуализировали электрофорезом в 2% агарозном геле (AGE). Что касается времени амплификации, реакции LAMP проводились при оптимальной температуре в течение 45, 60 и 90 минут с использованием различных количеств матрицы ДНК с последующим анализом AGE.Оптимизированные температура и время использовались в последующих экспериментах.

    Оптимизация этапа гибридизации для анализа с помощью тест-полоски с латеральным потоком (LFD)

    Были исследованы и сопоставлены два метода гибридизации ампликона LAMP с ДНК-зондом при подготовке к анализу LFD. Если не указано иное, все анализы LFD проводились при комнатной температуре. Метод I был широко используемым стандартным протоколом, называемым «гибридизацией после LAMP», с использованием обычного зонда для гибридизации с продуктами LAMP после завершения амплификации 12,15,29 .Вкратце, после проведения LAMP-реакций, содержащих 1 мкг, 100 мкг, 10 мкг и 1 мкг Mtb ДНК и воды, не содержащей ДНКазы (отрицательный контроль), при 65 °C в течение 60 мин без инактивации нагреванием, их немедленно смешивали с 20 пмоль обычного зонда с последующей инкубацией еще в течение 5 минут, чтобы обеспечить возможность гибридизации. Напротив, в методе II (in-LAMP) использовалось равное количество модифицированного зонда, который непосредственно смешивался с реакционным коктейлем LAMP перед амплификацией.После добавления ДНК-матрицы реакции инкубировали при 65 °C в течение 60 минут, чтобы одновременно происходили амплификация ДНК и гибридизация ДНК-зонд. Образцы полученных продуктов (5 мкл) каждого метода анализировали с помощью AGE. Для оценки эффективности гибридизации оставшийся продукт LAMP (15 мкл) разводили в 165 мкл (в 12 раз) буфером LFD (1X фосфатно-солевой буфер с 0,1% Tween 20). Затем палочку LFD (Milenia Biotec, Гиссен, Германия) погружали в разбавленное растворенное вещество на 2 минуты перед наблюдением за результатом теста.Результаты сравнивали с AGE. Для всех последующих экспериментов LFD был выбран оптимальный метод гибридизации. Обратите внимание, что в тестах, где продукты LAMP не использовались для анализа AGE, общее количество продукта LAMP в реакционном объеме 20 мкл было непосредственно разведено в 220 мкл буфера (такое же соотношение, как указано выше).

    Чувствительность гибридизации in-LAMP к нецелевой ДНК

    Была оценена способность обычных и модифицированных зондов для гибридизации in-LAMP различать продукты Mtb -LAMP от неродственной ДНК.Готовили премикс реакции LAMP без ДНК-мишени и разделяли на 2 группы: Группе (I) давали 20 пмоль обычного зонда, а Группе (II) снабжали модифицированным зондом в том же количестве. Обе группы инкубировали в неоптимизированных условиях (60 °C в течение 2 ч), чтобы обеспечить продукцию неспецифических ампликонов. Реакция со 100 нг Mtb -ДНК была включена в качестве положительного контроля для каждой группы. Продукты анализировали с помощью AGE и LFD для сравнения.Зонд, не проявляющий перекрестной реактивности с нецелевой ДНК, был выбран для подхода гибридизации in-LAMP. Во избежание путаницы комбинированный метод будет упоминаться в этой рукописи как «SH-LAMP-LFD», что является сокращением от «запускаемого зондом одного шага, s одновременной гибридизации ДНК h и LAMP в сочетании с методом LFD». .

    Сравнительная чувствительность SH-LAMP-LFD, LAMP-LFD и одноэтапной ПЦР-AGE

    Десятикратные серийные разведения Mtb -ДНК (1 нг, 100 пг, 10 пг, 1 пг, 100 фг, 10 фг , 1 фг, 100 мкг и 10 мкг) и плазмидную ДНК (10 4 , 10 3 , 10 2 , 10, 1 и 0.1 экз.) тестировали методом SH-LAMP-LFD. Тот же набор матриц ДНК (за исключением плазмид) был дополнительно протестирован с помощью двух других стандартных протоколов: общепринятого LAMP-LFD 12 и одностадийной ПЦР 30 .

    Специфичность SH-LAMP-LFD

    Специфичность SH-LAMP-LFD исследовали с использованием 100 нг матричной ДНК, полученной из каждого из 5 видов микобактерий ( Mycobacterium tuberculosis , M. bovis , M. авиум , М.fortuitum и M.intracellulare ), и 20 других неродственных бактерий, имеющих значение в качестве патогенов или возможных контаминантов в образцах ( Enterococcus faecalis , Staphylococcus aureus , S.pneunomonia , 600666 illus 6 euCC Bac B. subtilis BCC 6327 , Enterobacter cloacae , Enterobacter aerogenes DMST 1333 , Pseudomonas aeroginosa , Listeria monocytogenes 06 L09, 1115 90.ivanovii atcc 700402 ,

    2 , L.innocua DMST , L. Welshimeri DMST 20 559 , Salmonella Epidermidis Tistr 518 , S. Typhimurium ATCC 13,311 , S. Enteritidis ATCC 13 076 , S. Infantis DMST 26,426 , Escherichia coli O157:H7 ATCC 35 150 , Shigella sonnei , Vibrio parahaemolyticus ATCC 17 802 и V. cholerae O1 DMST 22 115. Все образцы микобактерий были получены на факультете тропической медицины Университета Махидол (FTMMU), Таиланд.Те, которые помечены DMST, ATCC и BCC, были приобретены в Департаменте медицинских наук (DMST, Таиланд), Американской коллекции типовых культур (ATCC, Манассас, Вирджиния) и Коллекции культур BIOTEC (BCC, Патум Тани, Таиланд) соответственно. Остальные образцы были получены из различных источников, включая Департамент биологии факультета науки и технологий Технологического университета Раджамангала, Патхум Тани, Таиланд ( E. faecalis ), Таиландский институт научных и технологических исследований ( S.epidermidis TISTR 518 ) и Таиландский центр исследования биоресурсов ( S. aureus ).

    Надежность SH-LAMP-LFD для клинических образцов

    Надежность SH-LAMP-LFD была оценена для обнаружения 104 образцов ДНК, выделенных из осадков мокроты пациентов с известным статусом ТБ, определенным с помощью стандартного культурального анализа ВОЗ, ссылка метод 31 . Вкратце, остатки протестированных образцов, полученные рутинным методом диагностики с использованием культивирования на среде Левенштейна-Йенсена, идентифицированные как М.tuberculosis с положительным результатом внутрилабораторного метода вложенной ПЦР в одной пробирке служил золотым стандартом 26,32 . Образцы были обезличены и предоставлены больницей Чулалонгкорн, Национальным центром генной инженерии и биотехнологии (BIOTEC), больницей Сирирадж и факультетом тропической медицины Университета Махидол. Все испытуемые образцы были ослеплены перед LAMP-анализом, чтобы предотвратить диагностическую погрешность при определении результатов. Результаты испытаний и демографические данные выборки (таблица 2) использовались для оценки диагностических характеристик SH-LAMP-LFD (таблица 3).

    Утверждение этики

    Этот проект получил одобрение Институционального наблюдательного совета (IRB ) медицинского факультета больницы Сирирадж Университета Махидол с документом Комитета по этике № 603/2555.

    Последовательное и одновременное двухосное растяжение пленки: в чем разница?

    15 февраля 2022 г.

    Последовательное и одновременное двухосное растяжение пленки: в чем разница?

    Брайан Лундгрен

    Директор по развитию бизнеса и маркетингу

    Когда речь идет о производстве двуосно ориентированных пленок, большинство из них знакомы с хорошо зарекомендовавшим себя методом последовательного растяжения, который используется при производстве подавляющего большинства двуосно ориентированных пленок и листов.Последовательное растяжение включает два шага: на первом используется устройство ориентации в машинном направлении (MDO) для растягивания материала в машинном направлении с помощью ряда роликов, эффективно увеличивая длину и уменьшая толщину полотна. На втором этапе устройство ориентирования в поперечном направлении (TDO) растягивает пленку или лист перпендикулярно MDO, растягивающемуся в поперечном (поперечном) направлении на ширильной машине, увеличивая ширину полотна и дополнительно уменьшая его толщину. Эти этапы обычно осуществляются последовательно один за другим после экструзии и отливки полотна.

    Последовательное растяжение чаще всего используется при производстве таких материалов, как BOPS, BOPP, BOPET, BOPLA и BOPTFE. Основное преимущество этого метода заключается в том, что он обеспечивает большую гибкость в условиях процесса (например, степени растяжения в продольном и поперечном направлениях) и высокую производительность. Это также относительно рентабельно.

    Однако, несмотря на свою распространенность, последовательное растяжение имеет недостаток. Тот факт, что он подвергает материал многократной нагрузке, ограничивает его способность обрабатывать небольшое количество материалов и предполагает непосредственный контакт с валами машины, что фактически может ухудшить оптические качества пленки.

    Альтернатива пленкам со специальными свойствами

    Существует еще один, менее распространенный метод, который идеально подходит для определенных видов пластиковой пленки и листов, особенно если материал не допускает последовательного растяжения в отдельные этапы или должен обладать исключительными оптическими свойствами. Этот метод называется методом одновременного растяжения. Он объединяет MDO и TDO в одноэтапный процесс растяжения с использованием очень специализированного ширильного станка.

    При одновременном натяжении полотно удерживается в ширильных зажимах и подвешивается в воздухе при растяжении как в машинном, так и в поперечном направлениях.Это позволяет улучшить оптические и механические свойства.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован.